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    您的(de)微量分光光度計測蛋白有問題?大(dà)概率原因找到(dào)了(le/liǎo)

        微量分光光度計主要(yào / yāo)用于(yú)核酸及蛋白質的(de)濃度測定和(hé / huò)純度評估。然而(ér),在(zài)實際應用中,經常會出(chū)現核酸較容易被準确測量,而(ér)蛋白質樣品的(de)濃度測量偏差較大(dà)的(de)情況。很多用戶也(yě)困惑于(yú)此,同樣是(shì)基于(yú)紫外吸收的(de)檢測,爲(wéi / wèi)何兩種樣品的(de)檢測性能會有差異呢?


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        坊間也(yě)時(shí)常出(chū)現一(yī / yì /yí)些說(shuō)法:微量隻能用于(yú)測核酸,而(ér)蛋白測不(bù)準。如果真是(shì)這(zhè)樣的(de)話,那麽設備的(de)使用率就(jiù)會大(dà)打折扣了(le/liǎo)。傳聞是(shì)不(bù)可輕信的(de),我們還是(shì)需要(yào / yāo)了(le/liǎo)解原因,然後才能找出(chū)解決方案。

    先上(shàng)一(yī / yì /yí)組數據看看

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        重複性和(hé / huò)穩定性是(shì)評判設備性能的(de)好方式,這(zhè)三台基礎型Nanophotometer® N50T機型在(zài)正确的(de)操作下,對較低濃度和(hé / huò)較高濃度樣品的(de)測量,都能夠得到(dào)一(yī / yì /yí)緻的(de)結果,CV<0.4%。如果設備性能都如此,那前面所述的(de)問題就(jiù)不(bù)存在(zài)了(le/liǎo)。

    普遍問題:蛋白樣品表面張力的(de)影響


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        蛋白質樣品,相較于(yú)核酸而(ér)言,更容易出(chū)現表面張力降低的(de)情況。因此,如果你的(de)微量分光光度計是(shì)采用樣品拉伸原理的(de),即形成液柱的(de)方法,對于(yú)一(yī / yì /yí)些樣品而(ér)言,是(shì)難以(yǐ)進行測量的(de),這(zhè)可能是(shì)造成測量準确性和(hé / huò)重複性不(bù)好的(de)大(dà)原因。



    01

    影響因素一(yī / yì /yí):溫度和(hé / huò)揮發



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        通常來(lái)說(shuō),液體的(de)溫度升高,由于(yú)分子(zǐ)間引力減弱,表面張力會随之(zhī)降低。這(zhè)也(yě)解釋了(le/liǎo)爲(wéi / wèi)何低溫保存的(de)核酸樣品,張力較大(dà),更易形成液柱。在(zài)夏天實驗環境較熱,或者制藥用戶的(de)恒溫恒濕實驗室,溫度是(shì)相對較高的(de),張力會随之(zhī)下降。

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        等一(yī / yì /yí)下,不(bù)是(shì)有空調嗎?空調産生的(de)氣流會大(dà)幅增加微量液體的(de)揮發,暴露在(zài)空氣中的(de)液柱易受到(dào)影響,對測量重複性影響較大(dà)。結果就(jiù)是(shì):房間熱易揮發,冷風吹也(yě)易揮發。

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    02

    影響因素二:鹽

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        無機鹽作爲(wéi / wèi)一(yī / yì /yí)種非表面活性劑,具有水合作用,趨向于(yú)把水分子(zǐ)拖入水中,因此會增大(dà)表面張力,反之(zhī)亦然。因此,脫鹽或低鹽的(de)樣品,表面張力會降低,常見于(yú)蛋白純化的(de)流程。例如在(zài)進行蛋白質結構分析或質譜分析時(shí),樣品需經過脫鹽處理,這(zhè)樣的(de)樣品在(zài)進行濃度測量時(shí),并不(bù)容易形成液柱。

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    03

    影響因素三:表面活性劑

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        蛋白提取過程中經常使用的(de)表面活性劑(清潔劑),如SDS、Triton X100,以(yǐ)及在(zài)發酵過程中加入的(de)消泡劑等成份,會大(dà)幅降低樣品的(de)表面張力(想想看,連維持泡沫的(de)張力都沒有了(le/liǎo)),這(zhè)些物質常會殘留在(zài)樣本中,難以(yǐ)完全去除。因此,在(zài)工藝過程中測量蛋白樣品,是(shì)一(yī / yì /yí)項挑戰。

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    04

    影響因素四:固液接觸表面

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        當使用移液器将微量樣品加載到(dào)點樣台後,會出(chū)現液體與固體的(de)接觸表面,點樣台表面的(de)親水/疏水性質會影響液體的(de)表面張力。因此,使用拉伸法的(de)主流品牌微量分光光度計,點樣台表面具有疏水性塗層,會增大(dà)液體的(de)張力。但是(shì),随着使用損耗,塗層會逐漸消耗,需要(yào / yāo)定期使用試劑進行維護和(hé / huò)再生。在(zài)正确的(de)維護之(zhī)後,這(zhè)一(yī / yì /yí)影響因素也(yě)随之(zhī)消失,但也(yě)增加了(le/liǎo)維護成本,而(ér)大(dà)多數用戶并不(bù)知道(dào)這(zhè)一(yī / yì /yí)點。

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    這(zhè)麽麻煩?我還測不(bù)測了(le/liǎo)!

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    我們換個(gè)思維,如果一(yī / yì /yí)台微量分光光度計的(de)測量原理,并不(bù)依賴于(yú)液體的(de)表面張力呢?Implen就(jiù)可以(yǐ),采用樣品壓縮技術的(de)Nanophotometer®檢測時(shí)無需形成液柱,而(ér)是(shì)将液滴壓縮爲(wéi / wèi)很薄的(de)液膜。因此,無論核酸、蛋白,都可以(yǐ)使用Nanophotometer®輕松測量。而(ér)封閉式的(de)檢測環境,也(yě)很好的(de)保護了(le/liǎo)樣品免受揮發影響。

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        無論是(shì)純化蛋白、總蛋白、結合蛋白、還是(shì)肽段樣品,Nanophotometer®都有豐富的(de)APP程序和(hé / huò)方法學應用,以(yǐ)及我們的(de)技術團隊提供的(de)支持,使您在(zài)蛋白濃度測量中遇到(dào)的(de)問題迎刃而(ér)解。

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