視網膜

視網膜是(shì)眼球中重要(yào / yāo)的(de)結構之(zhī)一(yī / yì ／yí)，它是(shì)位于(yú)眼球壁内層的(de)一(yī / yì ／yí)層透明薄膜，周圍布滿了(le／liǎo)大(dà)量的(de)感光細胞和(hé / huò)神經纖維，通過它可以(yǐ)直接接受來(lái)自外界環境的(de)光線并在(zài)眼球内形成影像，通過神經纖維将影像信息傳送至大(dà)腦中樞形成視覺。

其它中樞神經系統内也(yě)有小膠質細胞，在(zài)健康的(de)視網膜中，神經元和(hé / huò)小膠質細胞之(zhī)間的(de)交流對維持神經元向大(dà)腦發送信号的(de)能力非常重要(yào / yāo)。

視網膜血管作爲(wéi / wèi)人(rén)體内可以(yǐ)進行非創傷直接觀察的(de)深層微血管，其生理狀況的(de)檢查對高血壓、糖尿病、動脈硬化等心血管疾病的(de)診斷、治療評價具有重要(yào / yāo)意義。

一(yī / yì ／yí)般而(ér)言，眼底圖像通常都是(shì)通過激光掃描成像進行采集，但是(shì)由于(yú)眼底可觀測的(de)視野往往是(shì)很有限的(de)，一(yī / yì ／yí)個(gè)患者的(de)眼底信息需要(yào / yāo)多張掃描圖像才能完全顯示出(chū)來(lái)。這(zhè)種局限性大(dà)大(dà)不(bù)利于(yú)病情進行全面的(de)、細緻的(de)診斷。Tissue Cytometry全景組織流式定量分析技術進行全景圖像獲取，在(zài)單細胞、組織結構、細胞空間信息等多個(gè)層面進行定位、定性、定量分析。從而(ér)更好的(de)對病變區域進行有針對性的(de)跟蹤觀察和(hé / huò)全面分析。

實驗目的(de)

視網膜熒光樣本中小膠質細胞胞體、神經纖維識别、血管識别、血管斑點識别、神經元與血管的(de)距離分析。

實驗流程

1. 利用TissueFAXS系統進行玻片熒光的(de)全景掃描。

2. 使用StrataQuest分析軟件進行定量分析。

3. 根據FITC通道(dào)識别神經胞體并篩選出(chū)細胞胞體（細胞核識别算法）。

4. 膜識别FITC染色信号的(de)區域确定神經纖維，并對不(bù)同長度神經纖維進行分類。

5. 識别血管的(de)Texa Red染色區域面積及強度。

6. 計算神經元與血管間的(de)空間距離，并統計數量和(hé / huò)占比。

7. 根據毛細血管亮斑的(de)識别結果，統計新生小血管數量。

實驗過程

單通道(dào)灰階圖（↑：FITC，↓：Texa Red）

根據染色強度，染色面積，細胞形态學，利用正反向回溯功能和(hé / huò)設門圈選Gating，排除雜質，細胞碎片，黏連細胞（綠色框線标記），獲得神經元胞體，（粉色框線标記），并将胞體按照面積分爲(wéi / wèi)兩類（散點圖）。

由于(yú)該視網膜樣本是(shì)标記的(de)小膠質細胞，根據面積将神經胞體分爲(wéi / wèi)兩類（Small bodycell，Big bodycell），反向回溯Big bodycell中的(de)細胞後，應用Input Gate功能篩選短粗的(de)神經纖維，作爲(wéi / wèi)激活态的(de)小膠質細胞。

激活态小膠質細胞識别

血管識别：根據Texa Red通道(dào)進行識别，并去除面積小的(de)及非同一(yī / yì ／yí)焦面的(de)血管，僅對确定的(de)清晰的(de)同一(yī / yì ／yí)焦面的(de)大(dà)血管進行面積統計。

血管與小膠質細胞的(de)距離

血管與小膠質細胞的(de)距離0-0.1μm（紅色框線标記）

血管與小膠質細胞的(de)距離0.1-1μm（粉色标記）

血管與小膠質細胞的(de)距離1-3μm（粉色标記）

此外，Tissue Cytometry散點圖-熱力圖-數據同屏疊加對比功能，可以(yǐ)整合多種數據分析的(de)二維圖像，便于(yú)研究者們直觀的(de)對比與校驗；同屏對比功能，不(bù)但可以(yǐ)同屏預覽，還可以(yǐ)支持多點實時(shí)聯動縮放，便于(yú)觀察/分析圖像，打通信息分析時(shí)數據-圖像之(zhī)間的(de)屏障。