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    qPCR基線和(hé / huò)阈值的(de)概念及設置方法

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    圖2.擴增曲線顯示了(le/liǎo)設置不(bù)當的(de)基線 (A) 和(hé / huò)設置正确的(de)基線 (B)。



    阈值的(de)設置

    Applied Biosystems™提供兩種阈值設置方法:自動和(hé / huò)手動。自動設置中,軟件将自動選擇阈值,此阈值更适合平台更高的(de)曲線 (圖3中的(de)藍色曲線)。然而(ér)這(zhè)将導緻此數據組中的(de)紅色曲線的(de) Ct 值出(chū)現偏差,因爲(wéi / wèi)其至佳阈值比此值更低。通常情況下,默認設置通常已十分适當,但也(yě)可将阈值手動拖至指數期中間,以(yǐ)獲得更高的(de)準确度。因此,需對每個(gè)數據組進行獨立研究,這(zhè)樣才能根據具體情形選擇至佳阈值。


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    圖3.對數曲線屏幕截圖顯示了(le/liǎo)兩組曲線,它們的(de)平台高度和(hé / huò)指數期不(bù)同。擴增曲線中确定 Ct 的(de)至準确部分位于(yú)對數曲線指數期的(de)中間。至佳阈值設置有時(shí)因各組數據的(de)不(bù)同而(ér)異。


    轉載: 江西立康 公衆号 鏈接:https://mp.weixin.qq.com/s/pI_PVK4yUZcb7FH7ZoKMZA



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