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    哪些樣品能用超微量測?一(yī / yì /yí)文助你判斷樣品是(shì)否兼容

    Nanophotometer®可以(yǐ)測量的(de)樣品種類,是(shì)用戶關心的(de)問題。特别是(shì)經常測量的(de)核酸類樣品,我們一(yī / yì /yí)般用dsDNA的(de)濃度作爲(wéi / wèi)示例,以(yǐ)展示設備的(de)濃度測量範圍,而(ér)您可能會問,RNA可以(yǐ)測量嗎?引物可以(yǐ)測量嗎?短序列能測嗎?DNA納米材料能測嗎?

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    超微量分管光度計并不(bù)直接測量濃度,而(ér)是(shì)通過光學檢測器測量樣品的(de)吸光值,根據朗伯-比爾定律計算濃度的(de)。因此,符合該定律的(de)所有樣品均可以(yǐ)被測量。以(yǐ)NP80機型爲(wéi / wèi)例,檢測器的(de)檢測範圍爲(wéi / wèi)0.02A-330A(已換算爲(wéi / wèi)10mm下吸光值),波長範圍爲(wéi / wèi)200-900nm,那麽原則上(shàng)樣品的(de)吸光值和(hé / huò)吸收波長隻要(yào / yāo)落在(zài)這(zhè)個(gè)範圍内,都可以(yǐ)被測量,可獲得定量或相對定量的(de)濃度值和(hé / huò)其他(tā)信息。

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    核酸中的(de)嘌呤和(hé / huò)嘧啶堿基有共轭雙鍵,具有吸收紫外光的(de)性質,其至大(dà)吸收波長在(zài)250nm-270nm之(zhī)間。堿基與戊糖、磷酸形成核苷酸後,其至大(dà)吸收峰不(bù)會改變,至大(dà)吸收波長約在(zài)260nm,吸收低峰在(zài)230nm。目前通行的(de)标準,在(zài)波長260nm處,1單位OD值的(de)光密度相當于(yú)雙鏈DNA(dsDNA)濃度爲(wéi / wèi)50ng/μl、單鏈DNA(ssDNA)濃度爲(wéi / wèi)37ng/μl、RNA濃度爲(wéi / wèi)40ng/μl、單鏈寡核苷酸爲(wéi / wèi)33ng/μl(常規值)。

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    也(yě)就(jiù)是(shì)說(shuō),設備測量的(de)吸光值,乘以(yǐ)這(zhè)些系數(1/ε),就(jiù)可以(yǐ)得到(dào)對應樣品的(de)濃度值。任何種類的(de)核酸樣品都是(shì)可以(yǐ)測量的(de),關鍵是(shì)在(zài)軟件中正确選擇樣品種類。Nanophotometer®測量界面可選擇多種核酸樣品類型,在(zài)報告中也(yě)會有對應的(de)方法學及消光系數顯示。也(yě)可以(yǐ)輸入核苷酸的(de)序列來(lái)确定樣品具體的(de)消光系數(可支持70萬個(gè)以(yǐ)上(shàng)堿基序列,但通常用于(yú)寡核苷酸具體消光系數的(de)确認)。


    如果錯誤地(dì / de)選擇了(le/liǎo)樣品類型,但已完成了(le/liǎo)測量,也(yě)有兩種方法可以(yǐ)補救:

    方法一(yī / yì /yí):不(bù)擡起樣品蓋,重新選擇正确的(de)樣品類型,再次測量。Implen的(de)樣品壓縮法支持這(zhè)種操作,而(ér)液柱拉伸法不(bù)建議一(yī / yì /yí)滴樣品的(de)多次測量。

    方法二:在(zài)結果中查看吸光值數據,手動乘以(yǐ)消光系數,計算濃度。

    例如:測量RNA樣品時(shí),選擇了(le/liǎo)dsDNA樣品,測得濃度爲(wéi / wèi)200ng/μl,則樣品實際濃度應爲(wéi / wèi)160ng/μl(200/50×40ng/μl)(暫不(bù)考慮很小的(de)背景校正)。


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    對于(yú)蛋白質應用,原理相同,根據0.02-330A的(de)吸光值檢測範圍,結合蛋白質的(de)消光系數ε,可确定任意蛋白質樣品的(de)濃度檢測範圍。如BSA(消光系數0.667)檢測範圍爲(wéi / wèi)0.03-478mg/ml,則某消光系數爲(wéi / wèi)1.33的(de)單抗樣品檢測範圍即爲(wéi / wèi)0.015-239mg/ml。實際的(de)線性範圍需要(yào / yāo)根據樣品情況具體測試。 

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    Nanophotmeter®基于(yú)紫外-可見吸收光譜的(de)測量,不(bù)但可以(yǐ)勝任各種核酸和(hé / huò)蛋白質的(de)定量,還具備全光譜測量的(de)優異性能,Implen在(zài)分析化學領域也(yě)具有廣泛的(de)應用。樣品壓縮法的(de)一(yī / yì /yí)大(dà)特點就(jiù)是(shì)良好的(de)樣品兼容性,推出(chū)的(de)4096陣列CMOS檢測器也(yě)使測量的(de)可靠性進一(yī / yì /yí)步提高。對于(yú)多樣化的(de)樣本測量,Implen可以(yǐ)充分滿足用戶的(de)期望。


    轉載:江西立康公衆号 鏈接:https://mp.weixin.qq.com/s/rFeCiftwwKivc3_HSeq9ig

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